實驗步驟

（1）攤片：切片放65℃攤片機40min-1h。

（2）脫蠟水化：二甲苯Ⅰ（10min）→二甲苯Ⅱ（10min）→100 % 乙醇Ⅰ（10 min）→100 % 乙醇Ⅱ（10 min）→95 % 乙醇（5 min）→85 % 乙醇（5 min）→ 75 % 乙醇（5 min）

（3）洗片：雙蒸水洗5min×3次，PBS洗5 min×3次。

（4）阻斷：3% 過氧化氫37℃ 阻斷20min，PBST 5 min×3次。

（5）高溫高壓抗原修復(fù)：將盛有枸櫞酸鹽/檸檬酸鹽抗原修復(fù)緩沖液的染色缸置于高壓鍋中加熱至沸騰，將切片放入染色缸內(nèi)，保證抗原修復(fù)緩沖液沒過病理組織，待高壓鍋噴氣時開始計時2 min。修復(fù)完成后，待修復(fù)液自然冷卻至室溫后取出組織切片，PBST洗片5 min×3次。

（6）血清封閉：組織切片滴加一滴正常山羊血清封閉液，37℃ 孵育30min。

（7）孵育一抗：組織切片上滴加目的一抗，置于4℃12-16h。

（8）組織切片在室溫復(fù)溫30min，PBST洗片5 min×3次。

（9）在組織切片滴加生物素標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗，在37℃孵育30 min，PBST 洗片5 min×3次。

（10）組織切片滴加鏈霉素抗生物素-過氧化物酶溶液，37℃ 孵育30 min，PBST洗片5 min×3次。

（11）DAB顯色：避光配置DAB顯色劑（稀釋液：底物：色原 =20:1:1 ）, 現(xiàn)用現(xiàn)配。組織切片滴加DAB 顯色劑，放置顯微鏡下觀察，顯色完畢后立即將組織切片放入雙蒸水中終止顯色。

（12）蘇木素核染：組織切片滴加蘇木素染細(xì)胞核1 min，充分水洗后在鏡下觀察染色情況，顏色淺則繼續(xù)復(fù)染，如顏色過深則置于1% 鹽酸酒精中分化，最后使用自來水沖洗使細(xì)胞核顏色反至天藍(lán)色。

（13）常規(guī)脫水、透明：75 % 乙醇（5 min）→ 85 % 乙醇（5 min）→95 % 乙醇（5 min）→100 % 乙醇Ⅱ（10 min）→100 % 乙醇Ⅰ（10min）→二甲苯Ⅱ（10 min）→二甲苯Ⅰ（10 min）

（14）中性樹膠封片、自然風(fēng)干、標(biāo)注，正置顯微鏡下觀察并拍照（放大倍數(shù)：×200 ）

文章出自：免疫組化（IHC）   想了解更多請關(guān)注：http://www.gujratmining.com/